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本试剂盒可直接从动物组织、植物组织、血液、细胞、人的头发和口腔拭子扩增DNA，无需纯化过程。适于对大规模样品进行高通量的PCR筛选。同样也可应用于基因分型，转基因检测，基因敲除分析和测序。

本试剂盒含有高灵敏和稳定的DNA聚合酶，能对样品(包括DNA粗提液)进行有效扩增，延伸时间较短，并能提高产量。用户只需要加入2×Direct PCR Mix，热启动DNA聚合酶，一份样品，引物和水，即可启动PCR反应。用无菌ddH2O处理样品，有助于PCR的扩增。2×Direct PCR Mix含有凝胶上样试剂和绿色染料，因此PCR结束后PCR产物可直接进行琼脂糖凝胶电泳。

• 直接进行PCR，无需纯化步骤。
  
• 相当短的PCR反应时间，大概是1小时/35循环。
  
• 只需要微量样品。
  
• 热启动DNA聚合酶对PCR反应抑制剂具有很高的抗性。
  
• 适用于多种类型的样品。
  
• PCR结束后直接进行琼脂糖凝胶电泳。
  
• 节省时间和金钱。

• 模板
  
  • 动物或植物组织：
    
    • 直接将0.50mm直径的组织(大概和这个点这么大·)加入到20μL PCR反应体系中。
      
    • 加入大概2mg组织到20μL无菌ddH2O中。用100μL枪头贴着试管壁将组织压碎。短暂离心后取上清液0.5～1μL作为20μL PCR反应体系的模板。
  • 植物种子：
    除去种皮并切下一小块种子到20μL无菌ddH2O中。用100μL枪头贴着试管壁将组织压碎。短暂离心后取上清液0.5～1μL作为20μL PCR反应体系的模板。
    
  • 血液：
    直接将含有抗凝剂(肝素，EDTA，ACD)的血液0.5～1μL加入到20μL PCR反应体系中。
    
  • 动物细胞：
    直接将10²～10³个细胞加入到20μL PCR反应体系中。
    
  • 细菌：
    
    • 直接从琼脂培养基中挑取单菌落，加入到20μL PCR体系中。
      
    • 直接从琼脂培养基中挑取单菌落，加入到20μL无菌ddH2O。用100μL枪头贴着试管壁将其打碎。短暂离心后取上清液0.5～1μL作为20μL PCR反应体系的模板。
  • 根毛：
    剪2~3根根毛，直接加入到20μL PCR体系中。确保样品被溶液浸没。有些情况下，将反应体系提高到50μL能得到更好的结果。
    
  • 口腔拭子：
    收集拭子上的口腔细胞并加入到200μL无菌ddH2O中。振荡后对着试管壁用力压住拭子，确保大部分的液体留在管内。扔掉拭子。短暂涡旋，取0.5～1μL的上清作为20μL PCR体系的模板。
    
  • 石蜡包埋组织样品：
    单个10μm的石蜡切片组织用50～200μL的PCR反应缓冲液处理，其中含有0.2mg/mL蛋白酶K。缓冲液体积由组织切片的大小确定。样品在60℃水浴1h，然后98℃水浴10min使蛋白酶K失活。样品冷却后离心(16000×g，2min)，上清转移到新管中。取1～2μL的上清作为20μL PCR体系的模板。
• 根据下表准备反应体系
  

  成分	用量
  2×Direct PCR Mix	10μL
  Sample	Little/0.5～2μL
  Hot Start DNA Polymerase	0.5μL
  Primer F (10μM)	1μL
  Primer R (10μM)	1μL
  Sterilized ddH2O	至20μL

• 大多数PCR反应可使用下列循环程序
  

  过程	温度	事件	循环数
  预变性	98℃	30s	1
  变性	98℃	5s	35
  退火	50～68℃	5s
  延伸	72℃	1kb/20s
  终延伸	72℃	1min	1
  保持	4℃	-	-

• 如果PCR产物GC含量高，请加入1μL DMSO到20μL得PCR反应体系中；
  
• 如果PCR产物<1kb，延伸时间是20 s；
  
• PCR产物为平末端
  
• PCR产物纯化前，短暂离心并将上清移入新管。

• 产物少或没有。
  
  • PCR抑制成分太多。减少起始材料用量。
    
  • 实验样品DNA损伤或降解。使用新鲜样品。
    
  • 引物设计不完善。重新设计引物。
    
  • 循环程序未优化。调整循环条件到最优。提高循环次数。
    
  • 扩增长片段或是样品较难破碎时，请将样品按照说明书进行简单预处理后再进行扩增。
    
  • 困难模板。如果模板DNA的GC含量高，反应体系中加入5% DMSO有助于扩增。另外，使用高浓度的酶，20μL
    PCR反应体系中加入高达1μL的酶。
• 产物多条带。
  
  • 引物设计不完善。重新设计引物。
    
  • 退火温度过低。以2℃为一个增量，将温度提高到5种不同的温度。
    
  • 减少循环次数。
• 产物被污染。
  
  • 起始模板太多。减少起始样本量。
    
  • 引物设计不完善。重新设计引物。
    
  • Mg²⁺不合适。优化并调整MgCl₂浓度。